Holandako ikertzaileek CRISPR eta biolumineszentzia konbinatzen dituzte proba esperimental bateangaixotasun infekziosoak

Garatu berri den gaueko proteina batek gaixotasun birikoen diagnostikoa azkartu eta erraztu dezake, Herbehereetako ikertzaileen arabera.
ACS argitalpenetan asteazkenean argitaratutako ikerketak azido nukleiko birikoak eta haien itxura proteina urdin edo berde distiratsuak erabiliz azkar aztertzeko urrats bakarreko metodo sentikorra deskribatzen du.
Patogenoak identifikatzea haien azido nukleikoen hatz-markak detektatuz funtsezko estrategia da diagnostiko klinikoan, ikerketa biomedikoan eta elikagaien eta ingurumenaren segurtasunaren jarraipena egiteko.Oso erabiliak diren polimerasaren kate-erreakzio kuantitatiboen (PCR) probak oso sentikorrak dira, baina laginak prestatzeko edo emaitzen interpretazio sofistikatua eskatzen dute, eta ez dira praktikoak osasun-ezarpenetarako edo baliabide mugatutako ezarpenetarako.
Herbehereetako talde hau unibertsitate eta ospitaleetako zientzialarien arteko elkarlanaren emaitza da, azido nukleikoen diagnostiko metodo azkar, eramangarri eta erabilerraza garatzeko, hainbat esparrutan aplika daitekeena.
Ipurtargien distira, ipurtargien distira eta uretako fitoplanktonaren izar txikietan inspiratu ziren, bioluminiszentzia izeneko fenomeno batek bultzatuta.Ilunpeko disdira-efektu hau luciferasa proteinak parte hartzen duen erreakzio kimiko batek eragiten du.Zientzialariek argia igortzen duten sentsoreetan luciferasa proteinak sartu zituzten helburu bat aurkitzen dutenean behaketa errazteko.Horrek sentsore hauek arreta puntuan detektatzeko aproposa bihurtzen dituen arren, gaur egun ez dute proba klinikoetarako behar den sentsibilitate handia.CRISPR geneak editatzeko metodoak gaitasun hori eman dezakeen arren, urrats asko eta ekipamendu espezializatu osagarriak behar ditu lagin konplexu eta zaratatsuetan egon daitekeen seinale ahula detektatzeko.
Ikertzaileek CRISPRrekin lotutako proteina bat kamera digital soil batekin detekta daitekeen seinale bioluminiszente batekin konbinatzeko modua aurkitu dute.Analisirako RNA edo DNA lagin nahikoa zegoela ziurtatzeko, ikertzaileek birkonbinasa polimerasaren anplifikazioa (RPA) egin zuten, 100 °F inguruko tenperatura konstantean funtzionatzen duen teknika sinplea.Azido Nukleiko Lumineszentearen Sentsorea (LUNAS) izeneko plataforma berri bat garatu zuten, non bi CRISPR/Cas9 proteinak genomaren ondoko zati ezberdinetarako espezifikoak diren, bakoitza goian luciferasa zati berezi bat duela.
Ikertzaileak aztertzen ari diren genoma biral espezifikoa dagoenean, bi CRISPR/Cas9 proteina lotzen dira xede azido nukleikoen sekuentziara;hurbilean bihurtzen dira, eta oso-osorik luciferasa proteina sortu eta argi urdina igortzen dute substratu kimiko baten aurrean..Prozesu honetan kontsumitzen den substratua kontuan hartzeko, argi berdea igortzen zuen kontrol-erreakzio bat erabili zuten ikertzaileek.Berdetik urdinera kolorea aldatzen duen hodi batek emaitza positiboa adierazten du.
Ikertzaileek euren plataforma probatu zuten RPA-LUNAS saiakera garatuz, detektatzen duenaSARS-CoV-2 RNARNA isolamendu aspergarririk gabe, eta bere diagnostiko-errendimendua frogatu zuen lagin nasofaringeoetanCOVID 19gaixoak.RPA-LUNAS-ek SARS-CoV-2 detektatu zuen 20 minutuko epean 200 kopia/μL bezain RNA birikoaren karga zuten laginetan.
Ikertzaileek uste dute haien saiakuntzak beste birus asko erraz eta eraginkor detektatu ditzakeela."RPA-LUNAS erakargarria da arreta puntuko gaixotasun infekziosoen probak egiteko", idatzi zuten.